本发明公开了一种用于检测猪流行性腹泻病毒的单域重链抗体、制备方法及应用。本发明采用猪流行性腹泻病毒免疫阿拉善双峰驼，利用其外周血淋巴细胞建立针对猪流行性腹泻病毒的单域重链抗体库，将表达纯化的猪流行性腹泻病毒S蛋白偶联在酶标板上作为抗原，利用噬菌体展示技术对单域重链抗体库进行免疫性筛选，获得针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的单域重链抗体基因，将单域重链抗体基因转入大肠杆菌中，建立在大肠杆菌中高效表达的单域重链抗体株，分析每个单域重链抗体株的基因序列，获得针对猪流行性腹泻病毒S蛋白的单域重链抗体VHH链的氨基酸序列SEQ.ID.NO.8。